手工操作流程
1. 称0.3-0.5g土壤置于2ml离心管中,加入0.4g Glass Beads,再加入600μl Buffer C1与100μl Buffer C2。涡旋器高速震荡3-5min。
【注意:对含水量丰富的样品,可以预先离心除去部分水分后再称取样品。Buffer C2是我司独特的腐殖 酸除去剂,100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土 壤, Buffer C2的量可以适当增加,但不能超过250μl,否则会严重影响DNA的得率。】
2. 加入100μl Buffer C3(C3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用),涡旋混匀70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
【注意:如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA,请在70℃处理完后,再90℃水浴处理5min。】
3. 12000 rpm(~13000×g)离心1钟,转上清到1.5ml离心管中,加入180μl Buffer C4混匀。
4. 冰上放置5min。12000 rpm(~13000×g)离心5钟。 转移500μl上清到新的1.5ml离心管中。
【注意:转移上清时确保不要吸取到沉淀,转移的上清量最好不超过80%。】
5. 加入500μl Buffer C5与25μl MagIso Beads,混匀。静置静置3~5分钟吸附磁珠。
6. 转移至磁力架上,静置3~5分钟吸附磁珠。小心吸弃所有溶液。
7. 加入600ul Buffer MW1,涡旋混匀15秒。转移重悬液到新的离心管中。(可以省略此步)
8. 转移至磁力架上,静置2分钟吸附磁珠。小心吸弃所有溶液。
9. 加入600ul 75%乙醇,涡旋混匀15秒。
10. 转移至磁力架上,静置2分钟吸附磁珠。小心吸弃所有溶液。
11. 重复第9-10步一次。
12. 空气干燥7~10分钟。
13. 加50~100µl 预热至55oC的Elution Buffer或灭菌水等缓冲液,涡旋打散磁珠。静置3~5分钟,其间轻 轻振荡1~2次加速DNA溶解。
14 .转移至磁力架上,静置3分钟。转移DNA溶液至新的1.5ml离心管中。